【생물학】 세포실험 프로토콜 7강. 시료 처리

세포실험 프로토콜 7강. 시료 처리

 

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가. 세포의 시료 처리 방법 [본문]

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가. 세포의 시료 처리 방법 [목차]

ⅰ. case distribution

⑴ 대조군

⑵ D 20  

⑶ D 50 

⑷ D 100 

⑸ G 20 

⑹ G 50 

⑺ G 100 

⑻ DG 20 

⑼ DG 50  

⑽ DG 100

⑾ daidzein 

⑿ genistein 

⒀ DG : daidzein+genistein 

 

ⅱ. 분화유도 물질

1. IBMX 0.5M의 기본용액을 media에 희석해 최종 농도가 0.5 mM이 되도록 한다. Molecule mass: IBMX 222.3 g/mol

2. Dexamethasone 0.1 M의 기본용액을 media에 희석해 1 μM로 희석시킨다. Molecule mass: Dexamethasone 392.461 g/mol

3. Insulin 용액은 Sigma Aldrich에서 구매하여 사용하였으며, 10 mg/㎖의 용액을 10 μg/㎖로 media에 희석하여 사용하였다.

Molecule mass: Insulin 5807 g/mol

 

ⅲ. 시료처리

시료처리는 준비된 시약을 배지에 섞어서 처리하는 방법으로 진행되었다. 앞서 제시한 방법으로 기본 용액을 희석시켜 배지의 총량에 대한 시료의 몰 농도를 맞추어 처리하였다. 과정은 다음과 같다.

 

1. 분화 유도물질인 MDI와 각 시료에 대한 미리 만들어 놓은 기본용액을 준비한다.

2. DMEM에 FBS 10 %, PS 1 %를 섞어 분화배지를 만든다.

3. Seeding 된 well-plate에 분화 배지 분화유도물질을 각 well에 2 ㎖씩 넣는다.

4. 기본 용액들을 위에 식을 이용하여 각각 25 μM, 50 μM, 100 μM이 되도록 희석시켜 6 well-plate에 넣는다.

5. 6 well-plate를 CO₂ incubator에 넣고 배양한다.

 

입력: 2013.12.29 02:46

수정: 2020.04.22 18:14