【생물학】 광학현미경

광학현미경

 

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1. 개요 [본문]

2. 영구조직표본화 [본문]

3. 관찰 [본문]

4. 염색약 [본문]

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1. 개요 [목차]

⑴ 콘라드 게스너의 현미경 

⑵ 한스 얀센의 현미경 

⑶ 레벤후크 현미경  : 네덜란드의 레벤후크는 렌즈 깎는 기술이 뛰어나 렌즈 하나로 275배나 확대되는 단순 현미경을 만듦

⑷ Carl Zeiss의 현미경 : 19세기 중반에 제작된 독일식 현미경. Carl Zeiss가 설립한 회사는 현재에도 현미경 제품으로 매우 유명함

 

 

2. 영구조직표본화 [목차]

⑴ 고정(fixation) : 실험 동물의 조직을 적출하고 10 % 포르말린 또는 4% 포름알데히드를 이용하여 고정

① 주된 목적 : 조직을 불용성의 무반응성 물질로 만들어 autolysis 방지

② formaldehyde, paraformaldehyde, glutaraldehyde 등은 아미노산과 교차결합을 하여 세포를 고정함

③ 4% 포름알데히드를 이용한 고정 프로토콜 예시 (ref) ^]

○ 1^st. 미디어 석션

○ 2^nd. 1x DBPS로 두 번 washing

○ 3^rd. 3.7% formaldehyde in DPBS로 세포를 고정

○ 4^th. 3-5분 간 room temperature에서 incubation

○ 5^th. formaldehyde를 제거

○ 6^th. DPBS로 cell washing → 5분간 shaker에서 shaking

○ 7^th. DPBS로 cell washing → 5분간 shaker에서 shaking

○ 8^th. DPBS로 cell washing → 5분간 shaker에서 shaking

○ 9^th. chamber slide를 분리

○ 10^th. slide를 공기 중에서 말림

○ 11^th. slide를 -20 ℃ 냉동 보관

⑵ 탈수 : 100% 에탄올, 90% 에탄올, 80% 에탄올을 순차적으로 처리

⑶ 투명화 : 자일렌(xylene)을 처리하여 에탄올과 파라핀이 잘 섞이도록 해줌

① 말 그대로 투명하게 만들어줌

② 목적 : 광학현미경 상에서 빛이 투과할 수 있게 함

⑷ 58 ~ 60 ℃ 오븐에서 파라핀을 조직에 침투(infiltration)시키고, 포매(embedding)한 후 블록으로 만들어 박절(sectioning)

① 파라핀은 조직을 썩지 않게 해줌

② (참고) 조식 처리법 : 파라핀 처리, 동결 처리

⑸ 자일렌을 처리하여 파라핀을 제거

⑹ 100% 에탄올, 90% 에탄올, 80% 에탄올을 순차적으로 처리

⑺ 절편을 염색하고 봉입(mounting)하여 광학현미경으로 관찰

 

 

3. 관찰 [목차]

⑴ 대물렌즈, 접안렌즈

① 100배 배율에서 대물렌즈 한 눈금은 10 ㎛

② 100배 배율에서 대물렌즈 한 눈금당 접안렌즈 몇 눈금이 대응하는지 확인하는 게 일반적

③ 100배 배율에서 접안렌즈 1 눈금당 10 ㎛일 시, 1,000배 배율에서 접안렌즈 1 눈금당 1 ㎛임

⑵ 고배율로 갈수록 밝기 감소

⑶ 분해능 = 0.61 λ / n sin θ

① 1,000배 관찰 시

 

 

4. 염색약 [목차]

⑴ 산성, 염기성에 따른 분류

① 염기성 염색약 : 염기성 / 양이온성 염색약은 산성 / 음이온성 물질을 염색함

○ 크리스탈 바이올렛(crystal violet)

○ 사프라닌 O(safranin O)

○ 헤마톡실린(haematoxylin)

○ 메틸렌 블루(methylene blue)

○ 아세토카민 또는 아세트산 카민(acetocarmine)

○ 푹신(fuchsine)의 염기성형

○ 에틸렌브로마이드(EtBr)

○ 아세트올세인(acetoorcein)

② 산성 염색약 : 산성 / 음이온성 염색약은 염기성 / 양이온성 물질을 염색함

○ 에오신(eosin)

○ 푹신(fuchsine)의 산성형

⑵ 세포소기관에 따른 분류

① 핵 : 핵은 음전하를 띠기 때문에 양전하 염기성 염색약 모두 가능

② 리보솜 : 음전하를 띠기 때문에 양전하 염기성 염색약 모두 가능

③ 미토콘드리아

○ 야누스 그린(Janus green B)

④ 골지체

○ 오스믹산(osmic acid)

⑤ 단백질

○ 쿠마시 블루(Coomassle blue)

 

입력 : 2019.03.14 21:50