【생물학】 TEM negative staining 프로토콜

TEM negative staining 프로토콜 

 

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1. 개요

⑴ 본 포스팅은 NICEM 자료를 각색하였음 

⑵ 탄소 그리드 앞면과 뒷면

 

앞면과 뒷면은 헷갈리기 쉬우므로 꼭 주의하도록 하자.

Figure. 1. 탄소 그리드 앞면과 뒷면

 

 

2. negative staining protocol for bacteria

⑴ 1단계. 그리드 앞면에 샘플을 5 ul 떨어트리고 최대 1분 기다림

⑵ 2단계. blotting : droplet을 filter paper로 닦아줌

⑶ 3단계. 10초 동안 증류수로 세척 (생략 가능)

⑷ 4단계. blotting : droplet을 filter paper로 닦아줌

⑸ 5단계. filter paper 위에 그리드를 올려놓고 완전히 마를 때까지 수 분을 기다림 (단, 그리드의 앞면이 바닥에 닿지 않을 것)

 

 

3. negative staining protocol for exosomes, liposomes, proteins, etc

⑴ 1단계. glow discharge : 그리드 표면을 hydrophilic하게 하기 위한 과정

⑵ 2단계. 그리드 앞면에 샘플을 5 ul 떨어트리고 최대 1분 기다림 

⑶ 3단계. blotting : droplet을 filter paper로 닦아줌

⑷ 4단계. 5초 동안 증류수로 세척 (생략 가능)

⑸ 5단계. blotting : droplet을 filter paper로 닦아줌

⑹ 6단계. 2%의 uranyl acetate 20 ul을 떨어트리고 20초 ~ 30초 정도 기다림

① uranyl acetate는 toxic하므로 주의 

② 쓰고 나서 냉장보관할 것 

⑺ 7단계. blotting : droplet을 filter paper로 닦아줌

⑻ 8단계. filter paper 위에 그리드를 올려놓고 완전히 마를 때까지 수 분을 기다림 (단, 그리드의 앞면이 바닥에 닿지 않을 것)

 

입력 : 2021.12.17 16:23